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ELISA 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本采集、處理和保存

更新時(shí)間:2019-07-03      點(diǎn)擊次數(shù):3508

一、ELISA 實(shí)驗(yàn)中血清的采集、處理和保存

1、 真空采血針采集 2 ml 新鮮血液,加入無菌試管中。
2、 采血后室溫靜置 1 小時(shí)。
3、 將采集血液用離心機(jī) 4℃,2500rpm 離心 10 min,,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。 4、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時(shí); -20℃ 下,可放置保存 1 個(gè)月; -70℃ 下,可放置保存 6 個(gè)月。5、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定。 大部分 ELISA 檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以 HRP 為標(biāo)記的 ELISA 測(cè)定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。此外還應(yīng)避免細(xì)菌污染,因?yàn)榫w中可能含有含有內(nèi)源性過氧化物酶,也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。血清標(biāo)本宜在新鮮 時(shí)檢測(cè)。如在冰箱中保存過久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法 ELISA 中可使本底加深。

二、ELISA 實(shí)驗(yàn)中血漿的采集、處理和保存

1、 真空采血針采集 2 ml 新鮮血液,加入無菌試管中。
2、 按 1:9 加入抗凝劑(EDTA、草酸鈉、肝素、枸櫞酸鈉),30 分鐘內(nèi)于冰上分離血漿以 減少血小板的污染;(也可以直接用抗凝管采集)。
3、 將采集血液用離心機(jī) 4℃,2500rpm 離心 5 min,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。
4、 取上清.分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時(shí); -20℃ 下,可放置保存 1 個(gè)月; -70℃ 下,可放置保存 6 個(gè)月。
5、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定。 請(qǐng)注意指標(biāo)說明書上對(duì)于抗 凝血?jiǎng)┦欠裼刑厥庖?,建議使用 EDTA。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。 注意事項(xiàng):制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑 EDTA, 抗凝不*的標(biāo)本因纖維蛋白原干擾而造成假陽性。

三、ELISA 實(shí)驗(yàn)中尿液的采集、處理和保存

1、 采集尿液樣本 500ul,加入無菌試管中。
2、 將采集血液用離心機(jī) 4℃,2500rpm 離心 10 min,將離心好的樣本留上清,棄下面沉淀。

3、取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時(shí); -20℃ 下,可放置保存 1 個(gè)月; -70℃ 下,可放置保存 6 個(gè)月。

4、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定。

四、ELISA 實(shí)驗(yàn)中腦脊液的采集、處理和保存

1、采集腦脊液樣本,加入無菌試管中
2、將采集血液用離心機(jī) 4℃,2500rpm 離心 10 min,,將離心好的樣本留上清,棄下面沉淀。 3、取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時(shí); -20℃ 下,可放置保存 1 個(gè)月; -70℃ 下,可放置保存 6 個(gè)月
4、根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定。

五、ELISA 實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞上清液的采集、處理和保存

1、采集細(xì)胞培養(yǎng)上清液 500ul,加入無菌試管中。
2、將采集血液用離心機(jī) 4℃,2500rpm 離心 10 min,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。 3、取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時(shí); -20℃ 下,可放置保存 1 個(gè)月; -70℃ 下,可放置保存 6 個(gè)月。
4、根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定。

六、ELISA 實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞裂解液的采集、處理和保存(需要測(cè)蛋白濃度)

1、 取細(xì)胞培養(yǎng)板或細(xì)胞懸液,用 PBS(PH7.2-7.4)洗滌細(xì)胞培養(yǎng)板 1-2 次。
2、 通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑(裂解液),使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。
3、 將采集血液用離心機(jī) 4℃,2500rpm 離心 20 min,,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉 淀。 4、取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時(shí); -20℃ 下,可放置保存 1 個(gè)月; -70℃ 下,可放置保存 6 個(gè)月5、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定。

七、ELISA 實(shí)驗(yàn)中肺泡灌洗液的采集、處理和保存

1、 10% 水合氯醛溶液,腹腔麻醉。
2、 打開腹腔,另取 10 ml 注射器行下腔靜脈采血,盡可能將血放盡。
3、 在冰面上對(duì)左肺進(jìn)行肺灌洗。取 37℃ 生理鹽水 5 ml,分三次灌洗:2 ml、1.5 ml、1.5 ml 灌洗?;厥章试?70% 以上。
4、 將肺泡灌洗液用離心機(jī) 4℃,1500rpm 離心 10 min。
5、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時(shí); -20℃ 下,可放置保存 1 個(gè)月; -70℃ 下,可放置保存 6 個(gè)月。
6、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定。

八、ELISA 實(shí)驗(yàn)中關(guān)節(jié)滑液的采集、處理和保存

1、 口腔關(guān)節(jié):患者取坐位,常規(guī)消毒后,作皮下及關(guān)節(jié)后區(qū)局部浸潤(rùn)麻醉。然后囑患者大 張口,采用裝有 2 ml 生理鹽水的注射器(5 號(hào)針頭)作關(guān)節(jié)上腔 穿刺,髁后進(jìn)針,針尖方向斜向前、內(nèi)、上,抵達(dá)關(guān)節(jié)結(jié)節(jié)后斜面后稍后退,回抽如發(fā)現(xiàn)有淡黃色液體,即表明已進(jìn)入關(guān)節(jié)上腔,注入 2 ml 生理鹽水,反復(fù)注入、 回抽五次。 膝骨關(guān)節(jié)滑液:無菌穿刺取得關(guān)節(jié)液。
2、 將關(guān)節(jié)液用離心機(jī) 4℃,1500rpm 離心 15 min,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀
3、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時(shí); -20℃ 下,可放置保存 1 個(gè)月; -70℃ 下,可放置保存 6 個(gè)月。
4、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定。

九、 ELISA 實(shí)驗(yàn)中各類組織勻漿的采集、處理和保存(需要測(cè)蛋白 濃度)

1、 采集組織,在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,剔除附屬的結(jié)締組 織,稱取組織塊。
2、 用移液管量取 0.1M PBS 或者用 0.86% 冷生理鹽水,勻漿介質(zhì)或生理鹽水的體積總量應(yīng) 該是組織塊重量的 9 倍,用眼科小剪盡快剪碎組織塊(天然時(shí)操作要在冰水浴中進(jìn)行,將盛有組織 的小燒杯放入冰水中)。
3、 勻漿的方式有多種: a) 手工勻漿:將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,再將剩余的 1/3 勻漿介質(zhì)或生理鹽水 沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊,一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿,左手持勻漿管將下 端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次(6~8 分鐘),充分研碎,使組織勻漿化。 b) 機(jī)器勻漿:用組織搗碎機(jī) 10000~15000r/min 上下研磨制成 10% 組織勻漿,也可用 內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備(勻漿時(shí)間 10 秒/次,間隙 30 秒,連續(xù) 3~5 次,在冰水中進(jìn)行),皮膚、肌肉組織等可延長(zhǎng)勻漿時(shí)間。
4、 將制備好的 10% 勻漿用離心機(jī) 4℃,3000rpm 離心 15 min,將離心好的勻漿留上清,棄 下面沉淀。
5、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小時(shí); -20℃ 下,可放置保存 1 個(gè)月; -70℃ 下,可放置保存 6 個(gè)月。
6、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定。 

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